酶誘導(dǎo)是指細(xì)胞在底物影響下進(jìn)行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞色素P450（Cytochrome P450，CYP）催化，少部分由非CYP酶（如UGT酶）催化代謝。據(jù)統(tǒng)計(jì)，臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。

PART.01    CYP450酶誘導(dǎo)機(jī)理及試驗(yàn)方法

現(xiàn)已證明CYP450酶表達(dá)受孕烷X受體 (PXR)、組成型雄烷受體 (CAR)、芳烴受體（AHR）等核受體調(diào)控。這3個(gè)核受體均為轉(zhuǎn)錄因子，當(dāng)與配體結(jié)合激活后，核受體會從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核中。其中，PXR和AhR分別與細(xì)胞核內(nèi)的視黃醛X受體（RXR）和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ARNT）形成異源二聚體，進(jìn)而結(jié)合在相應(yīng)靶基因上（如CYP酶），調(diào)節(jié)CYP酶的表達(dá)。AhR參與CYP1A2的誘導(dǎo)；PXR主要參與CYP3A4的誘導(dǎo)，其次是2C亞家族；CAR與PXR的誘導(dǎo)譜非常重疊，此外有研究表明CAR還可以誘導(dǎo)CYP2B6。因此，在藥物早研期間，可只評估CYP1A2，CYP2B6 和 CYP3A4的誘導(dǎo)作用。

由于CYP酶誘導(dǎo)的試驗(yàn)是從“轉(zhuǎn)錄"、“翻譯"、“蛋白質(zhì)翻譯后修飾"直至成為活性CYP酶蛋白，所以CYP酶試驗(yàn)系統(tǒng)必須是肝細(xì)胞而非其亞結(jié)構(gòu)如肝微粒體或肝S9。隨后在CYP450酶誘導(dǎo)試驗(yàn)時(shí)，通常需要結(jié)合酶活性和mRNA兩個(gè)水平上的結(jié)果做結(jié)論。當(dāng)僅做酶活性試驗(yàn)時(shí)，若藥物同時(shí)存在酶抑制現(xiàn)象時(shí)，可能會掩蓋誘導(dǎo)作用；而測量mRNA水平則能更真實(shí)地反應(yīng)誘導(dǎo)源頭上的效應(yīng)，且更為敏感，直觀地避免了酶活性檢測存在的問題。

鑒于此，為滿足客戶精準(zhǔn)地了解其早研藥物的酶誘導(dǎo)作用，IPHASE技術(shù)人員成功研發(fā)人CYP450酶誘導(dǎo)表達(dá)檢測試劑盒（SYBR法）！

PART.02    IPHASE產(chǎn)品

IPHASE作為創(chuàng)新藥體外研究生物試劑，技術(shù)人員以SYBR染料法，采用ΔΔCT-定量PCR的方式檢測CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個(gè)CYP酶基因經(jīng)奧美拉唑、苯巴筆脫和利福平誘導(dǎo)后其mRNA水平的變化，發(fā)現(xiàn)其mRNA倍數(shù)變化均顯著增加，滿足藥物相互作用指導(dǎo)原則，說明IPHASE人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒（SYBR法）能夠滿足客戶在mRNA水平上進(jìn)行酶誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。

IPHASE人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒（SYBR法）提供給客戶提供進(jìn)行qPCR試驗(yàn)的擴(kuò)增試劑，CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個(gè)CYP酶基因以及一個(gè)內(nèi)參基因GAPDH的特異性引物。經(jīng)驗(yàn)證，IPHASE所提供的特異性引物擴(kuò)增效率高，且熔解曲線無雜峰，滿足客戶的試驗(yàn)需求。

圖1.CYP1A2引物擴(kuò)增效率圖

注：R2=98.4%；Eff%=106.401%

（R2越接近100%擴(kuò)增效率越好；Eff擴(kuò)增效率越接近90%~110%越好，下同）

圖2.CYP2B6引物擴(kuò)增效率圖

注：R2=98.5%；Eff%=95.791%

圖3.CYP2B6熔解曲線圖

圖4.CYP3A4熔解曲線圖

圖5.內(nèi)參基因GADPH標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

發(fā)    文    章    得     獎    勵(lì)

凡使用本公司產(chǎn)品，在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文（論文發(fā)表日起一年內(nèi)），并注明產(chǎn)品屬于匯智和源/IPHASE所有，即可申請獎勵(lì)。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同，給予不同金額獎品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元；

8分＜IF≤10分 1000元；

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注：禮品卡也可兌換同等金額產(chǎn)品購買抵用券；

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